小鼠小膠質BV2的培養步驟介紹

　　小鼠小膠質BV2“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經過三個階段：游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增Chemicalbook殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數／100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力較好時期，稱指數增生期(對數生長期)，適宜進行各種試驗。

　　小鼠小膠質BV2的培養步驟介紹：

　　1、培養基及培養凍存條件準備：

　　1）準備DMEM培養基(DMEM，GIBCO，貨號11965-092)，90%；胎牛血清，10%。

　　2）培養條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37攝氏度。

　　3）凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。

　　2、細胞處理：

　　1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

　　2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

　　3）細胞凍存：待細胞生長狀態良好時，可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時，棄去培養基后加入少量胰酶，細胞變圓脫落后，加入約1ml含血清的培養基后加入凍存管中，再添加10%DMSO后進行凍存。

　　對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

　　1、棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培養瓶中，置于37培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

　　3、按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

　　4、將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。